mRNA原液中采用HEPES作為buffer可能與前一步RNA聚合酶體外轉錄密切相關。
早在1987年便有研究報道使用HEPES緩沖對用于體外轉錄，在該研究中考察了不同反應條件下IHNV（感染性造血壞死病毒）的 RNA 聚合酶的體外轉錄，研究結果表明對比Tris，使用HEPES緩沖液可以最大限度地提高體外轉錄（IVT）效率。
研究中對緩沖條件的研究表明，HEPES緩沖液刺激的RNA合成量比Tris緩沖液高三倍（圖1 a），最佳濃度的HEPES緩沖液為400mM。
英國帝國理工大學醫學院傳染病系系主任Robin Shattock是mRNA預防性疫苗領域的專家，與BioNTech以及PNI等公司都有較為密切的合作。其團隊2021年發表關于saRNA體外轉錄體系優化的文章中，考察篩選了影響saRNA體外轉錄的關鍵影響因素，最終確定了采用40mM濃度的HEPES作為IVT反應體系buffer，具有更優的體外轉錄效果。
2016年BioNTech發表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES。該研究中使用HEPES緩沖液配置1mg/ml的RNA原液，用于進一步制備RNA-LPX。
HEPES作為IVT反應體系buffer具有優勢，這是我們結合相關文獻，推斷BioNTech采用HEPES緩沖對作為mRNA原液buffer的原因。
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